画像はコスモバイオ株式会社より転載
今回はバンバンカーを利用した細胞凍結法を紹介します。
一般的にはDMSOやグリセロール、血清などを用いることが多いですが、
段階的な凍結(予備凍結)が必要になったり、生存率がよくなかったりします。
バンバンカーは10% DMSO含有の無血清タイプ細胞凍結保存液です。
良い点としては、まず無血清であること。
予備凍結をせず-80℃に入れることが可能であること。
試薬の調整がいらないこと。などが挙げられます。
汎用性が高くバンバンカーで上手く保存がいかない細胞も少ないように感じます。
ES細胞の保存にも上手くいっているそうです。
もちろん悪い点はコストがかかることですね。
[Materials]
・バンバンカー
・対数増殖期に入った培養細胞
増殖期が過ぎた細胞を利用すると生存率が一気に下がります
(接着細胞の事前準備)
トリプシン等を用いて細胞を剥離する。
剥離した細胞は培養液で懸濁しておく。
・保存用チューブ (2 mlが一般的)
[Method]
1. 必要に応じてトリパンブルー染色にて生細胞の細胞数をカウントする。
2. 培養液をチューブにうつして遠心分離。
3. アスピレーターで上清を取り除く。
4. 細胞数が1mLで細胞数が5 x 105〜5×107になるようバンバンカーを加える。
5. 1mLづつ保存用チューブに分注。
6. 予備凍結などせず、そのまま-80℃に保存する。
7. 液体窒素での保存の場合は、12時間以上-80℃で保存した後、液体窒素に移す。
-80℃に保存の際、凍結処理容器バイセル（Funakoshi）を利用すると効果が上がることがあるそうです。
生存率が低い場合などは検討してみるのはいかがでしょうか。
また、保存液に入れてから凍結までの動作は迅速に行ないましょう。
コスモ・バイオ株式会社より転載。
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参考文献
| ・ | 細胞保存凍結液 (コスモ・バイオ株式会社) | ||
| ・ | 細胞凍結保存液バンバンカー (日本ジェネティクス株式会社)) | ||
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