2% X-galの調整

2% X-galの作り方です。

X-galは通称であり、

正式、名称は5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactopyranoside (5-ブロモ-4-クロロ-3-インドリル-β-D-ガラクトピラノシド)です。

X-gal(wikipediaより転載)

分子生物学においては、ラクトースオペロンの発現しているコロニーを簡単に見分けるために使用されています。

いわゆる青白選択というものです。

実際の反応は以下のようになっております。

β-ガラクトシダーゼと反応したX-galは、まず5-ブロモ-4-クロロ-3-インドールになり、

さらに酸化され、5,5′-ジブロモ-4,4′-ジクロロ-インディゴになります。

反応式(wikipediaより転載)

これがどうして青になるのか。

化学出身の方なら簡単にわかるでしょうが、

ここは一つ比較対象としてこちらを紹介します。

インディゴの構造式(wikipediaより転載)

反応式の最後と比べていただけるとわかるのではないでしょうか。

よくジーンズでインディゴブルーといいますが、

その青色を作っている染料(顔料)、インディゴの構造式です。似てますよね。

ジーンズ(wikipediaより転載)

こう思えばX-galの青色発色も身近に感じませんか。

では、2% X-galの作製方法を以下に示します。

[Materials]

・X-gal       MW=408.6

・DMF(ジメチルホルムアミド, N-N-dimethylformamide)

[Method]

(5 mLの場合)

1.  試薬を100 mgはかりとり、5 mLのDMFに溶かす。

2.ガラスもしくはポリプロピレンのチューブに入れ、アルミ箔で包んで遮光する*。

3. -20℃で保存。

4. プレートに塗る際には30-50 µLを滴下して使用する。培地に加える際には500倍希釈して使用される。

*フィルターなどを使って濾過滅菌をする必要はない

参考文献

・	Wikipedia contributors. “5-ブロモ-4-クロロ-3-インドリル-β-D-ガラクトピラノシド.” Wikipedia. Wikipedia, 8 Apr. 2012. Web. 26 Aug. 2012.
・	Wikipedia contributors. “インディゴ.” Wikipedia. Wikipedia, 21 Feb. 2012. Web. 26 Aug. 2012.
・	じっけんレシピ(PDF), SIGMA-ALDRICH
・	バイオ実験イラストレイテッド〈1〉分子生物学実験の基礎 (細胞工学別冊 目で見る実験ノートシリーズ) 中山 広樹,西方 敬人秀潤社Amazonで詳しく見る
・	バイオ試薬調製ポケットマニュアル―欲しい溶液・試薬がすぐつくれるデータと基本操作 田村 隆明羊土社 Amazonで詳しく見る

追記

2016年5月：Methodの記述間違いを修正しました。