1M HEPES バッファーの調整

2013/1/31 2013/1/31 Blog

HEPESとは4-(2-HydroxyEthyl)-1-PiperazineEthaneSulfonic acidを指します。

いわゆるグッドバッファーの一つです。

よく用いられるバッファーとしてTrisバッファーがありますが、

Trisバッファーはグッドバッファーではありません。

HEPESバッファーはTrisバッファーに比べて、

より生理的条件に近いです。

そのため、細胞培養、組織培養、タンパク質実験に多く用いられます。

一方で、TrisのpHが7~9なのに対して、

HEPESは6.8~8.2と狭くなっています。

[Materials]

・HEPES　MW=238.30

1M HEPES溶液の調整
試薬	使用量(100 mL)	使用量(500 mL)	最終濃度
HEPES	23.8 g	119.2 g	1 M
水酸化ナトリウム(NaOH) もしくは水酸化カリウム(KOH)	適量	適量	適量

*NaOHおよびKOHはpHの調整に用いる。基本的にはNaOHで作製をしておき、Naを加えられない時にKOHの利用をすると良い(逆でも可)。500 mLの場合5Nの溶液でおよそ40 mL近く加える必要がある。加えすぎた場合には塩酸で調整。取り扱いについてはそれぞれのリンク先を参照のこと。

[Method]

500 mLの場合

1. HEPESを400 mLの水に溶かす。

2. 水酸化ナトリウムにてpHを7.6に合うよう調整する。

3. 500 mLまでメスアップ

4. オートクレーブ

5. 4℃、暗所にて保存。

コストを考えると基本的にはTris-HClが利用されますが、

先述の通り、生理的な条件に近いため、

細胞培養、組織培養、タンパク質実験には良く使用されます。

細胞培養の際には10 mMから25 mMが推奨されるようです。

参考文献

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Wikipedia contributors. “HEPES.” Wikipedia. Wikipedia, 23 Sep. 2012. Web. 20 Jan. 2013.

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Wikipedia contributors. “HEPES.” Wikipedia, The Free Encyclopedia. Wikipedia, The Free Encyclopedia, 21 Dec. 2012. Web. 20 Jan. 2013.

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