0.5M EDTA (pH8.0)の調整

2012/2/12 2012/7/7 Blog

　　　　　　　　　EDTA(wikipediaより転載)

0.5M EDTA溶液を予め作製しておくと、便利です。

例えば、TAEの作製なんかでも使いますので、是非作っておきましょう。

EDTAとはエチレンジアミン四酢酸(wikipedia)で、いわゆるキレート剤(wikipedia)です。

生化学の実験においては重金属をキレートするためとか、酵素を不活化させるためとかに使われております。
また、培養上皮細胞にEDTA処理をするとCaでくっついているカドヘリンがほどけてしまいます。

実生活ではシャンプーも挙げられるそうです。

では、以下に調整方法を示します。

[Materials]

0.5M EDTA(pH8.0)の調整
試薬もしくは溶液	使用量(1 L)	最終濃度
EDTA (EDTA 2Na 2H₂0)	186.1 g	0.5 M
固形化NaOH (pH調整用)	20 g前後
5N NaOH (pH調整用)	適量

1. 800 mLの超純水にEDTAの粉末をゆっくり加えスターラーで撹拌する。
2. 固形化NaOHだんだんと加えて、EDTAを溶かす(pHの上昇に伴い溶けて行く)。
3. EDTAが溶けきったら、水酸化ナトリウム溶液でpHを8.0にし、1Lまでメスアップする。
4. オートクレーブして常温保存。

実際の実験では0.1~6mMの濃度で使用することが多いです。
なので、この作製した溶液は完全なストック溶液となります。1Lも作製する必要がなければ、200 mLであったり500 mL であったり各自調節をしてください。
また本プロトコールではEDTA 2Na 2H₂0を使用しておりますが、EDTAはNa塩が異なるものも売られています。別のものを使う際には分子量の計算をし直すとともに、追加するNaOHの量も調整してください。
EDTAは各種金属イオンとキレート結合をしますが、そのキレートの効果は溶液中のpH濃度に依存します。なのでpHを必要以上に高くしてしまうと、よくありません。

EDTAはキレート剤の万能薬である一方で、EGTAのようにカルシウムイオン選択的にキレートするものもあります。